本生歸納總結(jié)：ELISA顯色淡的原因及解決方案

　　顯色是ELISA中的后一步溫育反應(yīng)，此時(shí)酶催化無(wú)色的底物生成有色的產(chǎn)物。反應(yīng)的溫度和時(shí)間仍是影響顯色的因素。在一定時(shí)間內(nèi)，陰性孔可保持無(wú)色，而陽(yáng)性孔則隨時(shí)間的延長(zhǎng)而呈色加強(qiáng)。ELISA顯色淡的原因及解決方案:

　　原因一：試劑盒在運(yùn)輸途中時(shí)間太長(zhǎng)，溫度太高。

　　解決方案：盡量縮短運(yùn)輸時(shí)間，夏季應(yīng)放冰塊降溫。

　　原因二：試劑盒未充分平衡。

　　解決方案：試劑盒從2～8℃冰箱取出后打開(kāi)盒蓋，于室溫平衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫(約25℃)。

　　原因三：培養(yǎng)箱溫度不足37℃。

　　解決方案：注意培養(yǎng)箱溫度，放入反應(yīng)板后盡量減少開(kāi)啟次數(shù)以免影響溫度恒定，非隔水式培養(yǎng)箱尤其應(yīng)注意。

　　原因四：保溫時(shí)間不足。

　　解決方案：校正定時(shí)鐘準(zhǔn)確定時(shí)。

　　原因五：洗滌時(shí)沖擊力太大、浸泡時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、洗滌次數(shù)增加。

　　解決方案：按說(shuō)明書(shū)要求保留洗滌時(shí)間，準(zhǔn)確記住洗滌次數(shù)。

　　原因六：移液器吸液量不足，吸嘴內(nèi)壁掛水太多或內(nèi)壁不清潔。

　　解決方案：校正移液器，吸嘴要配套，裝吸嘴時(shí)要緊密，吸嘴內(nèi)壁要清潔，一次性使用。

　　原因七：蒸餾水水質(zhì)有問(wèn)題。

　　解決方案：使用新鮮合格的蒸餾。

　　原因八：底物作用時(shí)間不足。

　　解決方案：準(zhǔn)確定時(shí)。

　　顯色一定要控制時(shí)間，根據(jù)試劑盒說(shuō)明操作即可。一般來(lái)說(shuō)，顯色時(shí)間過(guò)短，結(jié)果偏低;顯色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，空白增高或者非特異性顯色增加。

　　注：以上僅供參考！

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